熒光顯微鏡是免疫熒光細胞化學的基本工具。是由光源、濾板系統(tǒng)和光學系統(tǒng)等主要部件組成。熒光顯微鏡利用一定波長的光激發(fā)標本發(fā)射熒光,通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標本的熒光圖像。細胞中有些物質,如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經紫外線照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。
熒光顯微鏡的使用方法
1、用窗簾遮蔽光線,關閉房間內的電燈,除去熒光顯微鏡的防塵罩,確保熒光顯微鏡燈室通風良好、無遮蓋。裝上汞燈燈箱,并轉動燈箱卡圈上的撥桿,將燈箱與鏡臂連接。
2、將汞燈燈箱的電源插頭插入熒光電源箱后的插座,再將熒光電源箱的插頭插入220V外接電源。
3、打開熒光顯微鏡電源開關,電壓表顯示出電源電壓,如電源電壓波動不大于額定電壓值的5%,即可按下啟動開關點燃汞燈,如因天氣太冷或電壓不穩(wěn)定等原因,一次啟動未點燃汞燈,可以多按幾次。待超高壓汞燈弧光達到穩(wěn)定狀態(tài)并達到Zda發(fā)光效率,即可開始工作。
4、燈泡的調中:
①任選一塊標本放在熒光顯微鏡載物臺上。
?、谵D動鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移出光路,轉動濾色片組轉換手輪,將紫光(V)或藍光(B)或綠光(G)激發(fā)濾色片組轉入光路,并將25熒光物鏡轉入光路。
③調節(jié)粗微調手輪,將標本像調焦清晰。
?、芮昂笸苿哟怪闭彰髌饔疫叺木酃忡R調焦推桿,使視場光欄成像清晰,轉動視場光欄撥桿將視場光欄收小,調節(jié)視場光欄調中螺釘使視場光欄居中,然后再將視場光欄開至Zda。
⑤轉動鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移入光路,前后調節(jié)燈箱上的聚光鏡撥桿,使汞燈的弧光在視場內成像清晰。
?、拚{整燈箱上的燈泡水平調節(jié)螺釘和垂直調節(jié)螺釘,使汞燈的弧光居中。
?、哒{整反光鏡水平調節(jié)螺釘和垂直調節(jié)螺釘,使光源的反射像與汞燈的弧光分開。
?、噢D動聚光鏡旋鈕把聚光鏡移出光路,此時視場照明均勻。